3/1:20201

2.2.1. ПРОЗРАЧНОСТЬ И СТЕПЕНЬ ОПАЛЕСЦЕНЦИИ ЖИДКОСТЕЙ

Опалесценция – это эффект поглощения или рассеяния света субмикроскопическими

частицами жидкости или неоднородности оптической плотности. При отсутствии каких-

либо частиц или неоднородностей раствор считается прозрачным.

Прозрачными считаются жидкости, которые по прозрачности не отличаются от воды P,

2.2.1.-1). Для подтверждения соответствия требованиям, приведенным в частных

монографиях, могут быть использованы также инструментальные методы определения

степени мутности при условии, что прибор соответствует требованиям, указанным ниже,

и если проведена калибровка с использованием суспензий сравнения I - IV и воды P или

используемого растворителя.

ВИЗУАЛЬНЫЙ МЕТОД

Для определения прозрачности и степени мутности жидкостей используют одинаковые

пробирки из бесцветного, прозрачного и нейтрального стекла с плоским дном и

Пригодность системы. Рассеянный свет должен быть таким, чтобы суспензия сравнения I

легко отличалась от воды P, а суспензия сравнения II легко отличалась от суспензии

сравнения I (таблица 2.2.1.-1).

ИНСТУМЕНТАЛЬНЫЙ МЕТОД

Инструментальная оценка прозрачности и опалесценции является более селективным

методом, который не зависит от остроты зрения аналитика. Числовые результаты более

наглядны для мониторинга качества и контроля процесса, особенно в проверке

стабильности при хранении. Например, предварительные числовые данные по

При просматривании суспензии под определенным углом к направлению падающего света

система кажется мутной вследствие отражения света от частичек суспензии (эффект

Тиндаля). Определенная часть светового луча, попадающего в мутную жидкость,

проходит через нее, другая часть поглощается, а оставшаяся часть рассеивается

суспендированными частицами. Эффект рассеяния света суспендированными частицами

может быть измерен с помощью либо проходящего света (турбидиметрия), либо

рассеянного света (нефелометрия). Турбидиметрические и нефелометрические данные

более достоверны при низкой мутности суспензий, когда наблюдается линейная

зависимость между значениями турбидиметрической и нефелометрической единицы

мутности и относительными сигналами детектора. При возрастании степени мутности

падающий свет попадает не на все частицы, а рассеянное излучение других частиц

поглощается на пути к детектору.

Для количественных определений необходимым является построение калибровочного

графика. Для подтверждения линейности необходимо построение калибровочного

Определение опалесценции окрашенных жидкостей проводят с помощью приборов с

относительным режимом, основанное на соотношении выбранных сигналов, так как

окрашивание оказывает негативное воздействие, ослабляя как падающий, так и

рассеянный свет, и уменьшает значение мутности. Эффект настолько велик, что даже в

случае умеренно окрашенных образцов обычные нефелометры не могут быть

использованы.

В относительной турбидиметрии или нефелометрии находят отношение интенсивности

прошедшего света к интенсивности рассеянного света под углом 90°. Проведение такого

испытания компенсирует влияние окрашивания испытуемого образца.

углом (90 ± 2.5)° регистрируется первичным детектором. Остальные детекторы

регистрируют интенсивность рассеяния в прямом и в обратном направлениях, а также

интенсивность проходящего света.

Используемые приборы калибруют с использованием стандартов с известной степенью

мутности; кроме этого, приборы должны быть способны к автоматическому определению

степени мутности. Результаты испытания считываются непосредственно с дисплея

прибора и сравниваются со спецификацией, приведенной в частной монографии.

В качестве альтернативы источника света с целью устранения влияния окрашивания

суспензий сравнения, описанных в разделе «Визуальный метод», могут быть

использованы для подтверждения соответствия требованиям частной монографии вместо

визуального определения.

– Единица измерения: NTU (Nephelometry Turbidity Units – нефелометрические единицы

мутности). NTU основана на мутности первичного стандартного образца формазина.

Также могут использоваться FTU (Formazin Turbidity Units - единицы мутности по

формазину) или FNU (Formazin Nephelometry Units - формазиновые нефелометрические

единицы), которые эквивалентны NTU при низких значениях (до 40 NTU). Эти

единицы используются во всех трех инструментальных методах (нефелометрия,

турбидиметрия и турбидиметрия и нефелометрия в относительном режиме).

– Диапазон измерений: от 0.01 NTU до 1100 NTU.

– Разрешение: 0.01 NTU в диапазоне (0 – 9.99) NTU; 0.1 NTU в диапазоне (10.0 – 99.9)

диапазоне (20 - 1100) NTU.

Могут быть использованы приборы с характеристиками (диапазоном измерения,

разрешением, точностью, повторяемостью), отличными от указанных выше, при условии,

что они полностью валидированы и подходят для предполагаемого использования.

КОНТРОЛЬ РАБОТЫ ПРИБОРА

– Калибровка: используют 4 суспензии сравнения формазина в интересующем диапазоне.

Могут быть использованы суспензии сравнения, описанные в данной монографии, или

попадает на оптическую систему детектора, но приходит не от испытуемого образца.

Источниками постороннего света могут быть: дефекты и царапины на ячейках для

образцов, внутренние отражения оптической системы, загрязнения оптики или камеры

ячейки образцов пылью и электронные помехи. Конструкция прибора также может

влиять на посторонний свет. Влияние постороннего света снижается при измерениях в

относительном режиме.

Для отдельных испытуемых фармацевтических субстанций/лекарственных препаратов для

подтверждения возможности использования также должна быть валидирована методика

испытания. Прибор и методология не должны противоречить свойствам испытуемого

Формазин обладает рядом характеристик, обуславливающих его широкое использование в

качестве стандарта для определения мутности. Он может быть воспроизводимо

приготовлен из предварительно проанализированных реактивов. Физические

характеристики позволяют использовать его в качестве стандарта для калибровки

светорассеяния. Полимер формазин состоит из цепей различной длины, которые

принимают случайные конфигурации. Это приводит к получению частиц с широким

спектром форм и размеров, аналитически соответствующих частицам с другими

возможными размерами и формами, находящимся в испытуемых образцах. Благодаря

трассируемости, воспроизводимости и светорассеивающим свойствам формазина

инструментальные калибровочные алгоритмы и критерии выполнения основаны на этом

стандарте. Стабилизированные суспензии формазина, пригодные для приготовления

стабильных разведенных стандартов мутности, являются коммерчески доступными и

могут быть использованы в случае, если выдерживают сравнение со стандартами,

водой P до объема 100.0 мл. Раствор выдерживают в течение 4 – 6 ч.

Раствор гексаметилентетрамина. 2.5 г гексаметилентетрамина P растворяют в 25.0 мл

воды P в колбе с притертой пробкой вместимостью 100 мл.

Первичная опалесцирующая суспензия (суспензия формазина). 2.5 г

гексаметилентетрамина P растворяют в 25.0 мл воды P в колбе с притертой пробкой

вместимостью 100 мл. К приготовленному раствору гексаметилентетрамина добавляют

25.0 мл раствора гидразина сульфата, перемешивают и выдерживают в течение 24 ч.

Суспензия стабильна в течение 2 мес при хранении в стеклянной посуде, которая не имеет

Суспензии сравнения. Приготовление суспензий сравнения проводят в соответствии с

таблицей 2.1.2.1.-1. Стандарт опалесценции и воду P смешивают и встряхивают

непосредственно перед применением.

Определение степени мутности суспензий сравнения I – IV в относительном режиме

показало, что зависимость между концентрациями и измеренными значениями NTU

является линейной (см. таблицу 2.1.2.1.-2).